การตรวจวิเคราะห์เชื้อ Vibrio cholerae และ Vibrio parahaemolyticus จากตัวอย่างหอยนางรมสดโดยเทคนิคดูเพล็กซ์พีซีอาร์

Abstract

หอยนางรมเป็นอาหารทะเลที่นิยมบริโภคมากในปัจจุบัน โดยนิยมบริโภคแบบสุกๆ ดิบๆ ทำให้มีความเสี่ยงในการติดเชื้อแบคทีเรียในสกุล Vibrio spp. ผ่านทางอาหารทะเลที่มีการปนเปื้อนของเชื้อนี้ เชื้อแบคทีเรีย Vibrio cholerae และ Vibrio parahaemolyticus เป็นแบคทีเรียที่เป็นสาเหตุหลักของการติดเชื้อ และโรคอาหารเป็นพิษ โดยทั่วไปวิธีการทางจุลชีววิทยาพื้นฐาน เป็นวิธีที่นิยมใช้ทางห้องปฏิบัติการในการตรวจวิเคราะห์ ซึ่งวิธีนี้จะใช้เวลานานในการตรวจสอบ ในการศึกษาครั้งนี้จึงทำการพัฒนาวิธี Duplex PCR เพื่อเพิ่มความรวดเร็ว ความจำเพาะเจาะจง และความไวในการตรวจวิเคราะห์เชื้อ V. cholerae และ V. parahaemolyticus ในหอยนางรม โดยทำการออกแบบไพรเมอร์จากยีน ompW สำหรับ V. cholerae และยีน tlh สำหรับ V. parahaemolyticus จากการศึกษาความไวของเทคนิค Duplex PCR โดยใช้จีโนมิคดีเอ็นเอของ V. cholera และ V. parahaemolyticus พบว่าความเข้มข้นต่ำสุดที่สามารถตรวจวิเคราะห์ V. cholerae และ V. parahaemolyticus เท่ากับ 3.4 ng/ml และ 0.34 ng/ml ตามลำดับ

Oysters are the famous seafood that are intended to be eaten raw or slightly cooked. The consumption of raw oysters leads to risk of Vibrio spp. Infection. Generally, the conventional methods used for Vibrio spp. Detection are time-consuming and laborious. This study has developed Duplex-PCR techniques for increasing a rapid, specific and sensitivity detection of V. cholerae and V. parahaemolyticus in oysters. The duplex-PCR primers were designed by using ompW and tlh gene from V. cholerae and V. parahaemolyticus, respectively. Duplex-PCR amplification of genomic DNA segments showed that the minimum amount of gDNA detection of V. cholerae and V. parahaemolyticus in oysters was 3.4 ng/ml and 0,34 ng/ml, respectively.