การพัฒนาวิธี IgM dot-ELISA เพื่อตรวจหาแอนติบอดีต่อเชื้อ Burkholderia pseudomallei

Abstract

งานวิจัยนี้เป็นการพัฒนาวิธี dot-ELISA เพื่อตรวจหาแอนติบอดีชนิด IgM ต่อเชื้อ B. pseudomallei ซึ่งทำให้เกิดโรคเมลิออยโดซิส โดยโรคนี้มีอัตราป่วยและอัตราตายสูงหากไม่ได้รับการวินิจฉัยและรักษาอย่างทันท่วงที ผลการตรวจทางห้องปฏิบัติการที่รวดเร็วจึงช่วยลดอัตราตายจากโรคนี้ ผู้วิจัยได้พัฒนาหลักการ IgM dot-ELISA โดยหาสภาะวที่เหมาะสม พบว่าเคลือบแอนติเจนความเข้มข้น 1 µg/ml โดยใช้น้ำเหลืองเจือจาง 1:100 และคอนจูเกตเจือจาง 1:10,000 นำมาทดสอบกับน้ำเหลือง 100 ตัวอย่าง ประกอบด้วย ผู้ป่วยโรคเมลิออยโดซิส 49 ตัวอย่าง คนปกติที่อาศัยอยู่ในพื้นที่การระบาด 10 ตัวอย่าง คนปกติที่ไม่ได้อาศัยอยู่ในพื้นที่การระบาด 13 ตัวอย่าง และผู้ป่วยโรคอื่นๆ ที่ไม่ใช่โรคเมลิออยโดซิส ได้แก่ เลปโตสไปโรซิส, ซิฟิลิส, ไข้เลือดออก และสครับไทฟัส 28 ตัวอย่าง พบว่าวิธี IgM dot-ELISA ที่พัฒนาขึ้นนี้มีค่าความไว, ความจำเพาะ, ค่าทำนายผลบวก, ค่าทำนายผลลบ และประสิทธิภาพเป็น 85.71% 80.39% 80.77% 85.42% และ 86% ตามลำดับ อย่างไรก็ตามควรเพิ่มจำนวนตัวอย่างน้ำเหลืองในทุกกลุ่มเพื่อความน่าเชื่อถือของผลการวิจัยและปรับปรุงวิธี IgM dot-ELISA ให้มีความเหมาะสมสำหับการนำไปใช้ตรวจคัดกรองผู้ติดเชื้อระยะเริ่มแรกต่อไป

Dot-ELISA for detection of B. pseudomallei IgM antibody is developed for screening of melioidosis. Melioidosis has high morbidity and mortality rate if patient is not diagnosed and provided with effective antibiotics on time. Rapid laboratory diagnostic decreases mortality rate and support for primary diagnosis and treatment. Checkboard titration is performed to optimize IgM dot-ELISA conditions. Results show that optimal concentration of coated antigen is 1 µg/ml at serum dilution of 1:100 and conjugate dilution of 1:10,000. A total number of 100 serum samples, consisting of 49 melioidosis patients, 10 healthy people in endemic area, 13 healthy people in non-endemic area and 28 sera of other diseases included Leptospirosis, Syphilis, Dengue hemorrhagic fever and Scrub typhus. Sensitivity, specificity, positive predictive value (PPV) , negative predictive value (NPV) and efficiency of IgM dot-ELISA were 85.71% 80.39% 80.77% 85.42% and 86% respectively. However, more serum samples are needed in further evaluation and development of screening test for diagnosis of primary melioidosis.