ทูเมอร์เนคครอซิสแฟคเตอร์แอลฟาป้องกันการตายของเซลล์มะเร็งท่อน้ำดีโดยกระตุ้นขบวนการส่งสัญญาฯ MAPK และ AKT

Abstract

วัตถุประสงค์ในการวิจัยในครั้งนี้ คือต้องการเข้าใจถึงสาเหตุที่ทําให้มะเร็งท่อน้ําดีเป็นมะเร็งที่มีความก้าวร้าวและต่อต้านการรักษาตามแบบแผนในปัจจุบัน ผู้วิจัยจึงทําการทดสอบที่จําเพาะลงไปถึง การต่อต้านทูเมอร์เนคครอซิสแฟคเตอร์แอลฟา (TNF-alpha) ในการฆ่าเซลล์มะเร็งท่อน้ําดี ซึ่งต่างจากเซลล์มะเร็งชนิดอื่นๆ การวิจัยในครั้งนี้ จึงได้ทดสอบกลไกการต่อต้านการฆ่าด้วยทูเมอร์เนคครอซิสแฟคเตอร์แอลฟาโดยใช้เซลล์มะเร็งท่อน้ําดีชนิด KKU-100 ซึ่งได้จากผู้ป่วยคนไทยมาเป็นต้นแบบ การทดสอบ ด้วยวิธีเอ็มทีที พบว่า การใส่ทูเมอร์เนคครอซิสแฟคเตอร์แอลฟาที่มีความเข้มข้นถึง 80 นาโนกรัมต่อ มิลลิลิตร ไม่ส่งผลต่อการมีชีวิตรอดของเซลล์มะเร็งท่อน้ําดี อย่างไรก็ตาม การเพิ่มความเข้มข้นของ ทูเมอร์เนคครอซิสแฟคเตอร์แอลฟามีผลต่อการเพิ่มระดับของ pMAPK1/2 และ pAKT ซึ่งชี้ให้เห็นว่า ขบวนการส่งสัญญาณของ MAPK และ/หรือ AKT อาจเกี่ยวข้องกับการต่อต้านการฆ่าเซลล์มะเร็งด้วย ทูเมอร์เนคครอซิสแฟคเตอร์แอลฟา ดั้งนั้น จึงได้ทดสอบโดยยับยั้งขบวนการส่งสัญญาณของ MAPK หรือ AKT โดยใช้ U0126 หรือ LY294002 ซึ่งเป็นตัวยับยั้ง MEK1/2 และ AKT ตามลําดับ และประเมินผล การยับยั้งขบวนการส่งสัญญาณนี้ในเซลล์มะเร็งท่อน้ําดีชนิด KKU-100 ร่วมกับภาวะที่มีทูเมอร์เนคครอซิส แฟคเตอร์แอลฟา ผลการทดสอบพบว่า ภาวะร่วมกันนี้ มีผลต่อการลดลงของการอยู่รอดของเซลล์อย่างมีนัยสําคัญทางสถิติ เมื่อเทียบกับภาวะที่มีทูเมอร์เนคครอซิสแฟคเตอร์แอลฟาหรือตัวยับยั้งเพียงอย่างเดียว นอกจากนี้ ผลการทดสอบในภาวะนี้ยังสอดคล้องกับการเกิดอะพอพโทซิสที่เพิ่มมากขึ้นอย่างมีนัยสําคัญเมื่อทดสอบด้วยการย้อมสี DAPI สรุปโดยภาพรวม ทูเมอร์เนคครอซิสแฟคเตอร์แอลฟากระตุ้นขบวนการ ส่งสัญญาณของ MAPK และ AKT เป็นคุณลักษณะสําคัญในการต่อต้านการฆ่าเซลล์มะเร็งท่อน้ําดี ซึ่งเป็นสาเหตุของความก้าวร้าวในมะเร็งท่อน้ําดี

The objective of this study was to understand what made cholangiocarcinoma an aggressive cancer and why it is resistant to conventional therapy. Specifically, we aim to determine why, unlike many cancer cell types, cholangiocarcinoma cells are tolerant to killing induced by TNF-alpha. Here, the underlying mechanism of this tolerance was investigated using KKU-100, a cholangiocarcinoma cell line derived from a Thai patient as a model. Treatment with TNF-alpha up to 80 ng/ mL had no significant effect on KKU-100 cell viability as determined by MTT assay. However, increasing concentrations of TNF-alpha enhanced pMAPK1/2 and pAKT levels, suggest that activation of MAPK and/or AKT signaling pathways might be responsible for tolerance to TNF-alpha-induced cell death. This idea was tested by blocking the MAPK or AKT signaling pathways with U0126 or LY294002, a MEK1/2 or an AKT inhibitor, respectively, and assessing the effects of this blocking in the TNF-alpha-treated KKU-100 cells. The results showed that the combination therapy significantly reduced cell viability in KKU-100 cells compared to monotherapy with TNF-alpha or the inhibitor alone. In addition, significantly more apoptotic nuclei were induced as shown by nuclear staining with DAPI. Together, results of this study show that MAPK and AKT signaling pathways were activated by TNF-alpha and this may be an important attribute to TNF-alpha tolerance which underlies the aggressiveness in cholangiocarcinoma cells