การศึกษาเบื้องต้น Variant ของยีน CD36 ในส่วน Exon 2-7 ในผู้บริจาคโลหิต CD36 Deficiency จำนวน 5 ตัวอย่าง

Abstract

วัตถุประสงค์ เพื่อหาสภาวะที่เหมาะสมการทำ Polymerase Chain Reaction (PCR) และหา Variant ของยีน CD36 ในส่วนของ Exon ที่ 2 ถึง 7 ในกลุ่มผู้บริจาคโลหิตที่เป็น CD36 Deficiency ของศูนย์บริการโลหิตแห่งชาติ สภากาชาดไทย วิธีการทดสอบ : หาสภาวะที่เหมาะสมของวิธี PCR และวิเคราะห์หา variant ของยีน CD36 ในส่วนของ exon ที่ 2 ถึง 7 จากผล DNA Sequencing ของ CD36 deficiency type I จำนวน 1 ราย และ CD36 deficiency type II จำนวน 4 ราย ผลการทดลอง: สภาวะที่เหมาะสมวิธี PCR ของ exon 2 ถึง 5 คือ initial denaturation 96 °C 5 นาที, denaturation 96 °C 30 วินาที, annealing 58 °C 45 วินาที, extension 72 °C 30 วินาที และ final extension 72 °C 7 นาที ส่วน exon 6 ถึง 7 คือ annealing 55 °C 45 นาที ช่วงอื่นเหมือนโปรแกรมแรก พบว่ามี variant ที่น่าสนใจใน exon ที่ 5 คือ 332-333 delCA ในตัวอย่าง CD36 deficiency type I และ 287 G>C ในตัวอย่างที่เป็น CD36 deficiency type II

Objective: The aim of this study was to optimize Polymerase Chain Reaction (PCR) condition and detect the variant of CD36 gene on exon 207 in CD36 deficiency donors of National Blood Center, Thailand Red Cross Society. Method: We examined optimal conditions for PCR technique and analyzed the variant of CD36 gene on exon 207 from CD36 deficiency type I (1 sample) and CD36 deficiency type II (4 samples) DNA sequencing. Results: The optimal PCR condition for exon 205 was initial denaturation 96 °C for 5 minutes denaturation 96 °C for 30 seconds annealing 58 °C for 45 seconds, extension 72 °C for 30 seconds and final extension 72 °C for 7 minutes while the optimal condition for exon 6-7 was program which was similar to first program except annealing temperature was at 55 °C for 45 seconds. Interestingly, we found variant in exon 5 which was 332-333 delCA in CD36 deficiency type I and 287 G>C in one of the CD36 deficiency type II.