การศึกษาฤทธิ์ทางชีวภาพและองค์ประกอบทางเคมีของสมุนไพรตำรับแคปซูลเสือขาว

Abstract

โครงการวิจัยนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาฤทธิ์ทางชีวภาพ และปริมาณสารสำคัญของสมุนไพรตำรับเสือขาว หรือป๋ายหู่เซียนตาน เพื่อประเมินประสิทธิภาพการเสริมภูมิของสมุนไพรเสือขาวที่มีผลต่อผู้บริโภค โดยประกอบด้วย โครงการย่อย 2 โครงการคือ การศึกษาฤทธิ์ทางชีวภาพและองค์ประกอบทางเคมีของสมุนไพรตำรับแคปซูลเสือขาว และผลของสมุนไพรจีนป๋ายหู่เซียนตานร่วมกับการฝังเข็มต่อความแปรปรวนของอัตราการเต้นของหัวใจในกลุ่ม ตัวอย่างสุขภาพดีโครงการย่อยที่ 1 ได้นำตำรับเสือขาวซึ่งมีตัวยาสมุนไพรเดี่ยวทั้งหมด 12 ชนิดและตำรับเสือขาว มาสกัดด้วยตัวทำละลาย 3 ชนิดคือเอทิลแอซิเทต เอทานอลและน้ำจากนั้นนำสารสกัดทดสอบฤทธิ์ต้านจุลินทรีย์สาม ชนิดคือ Escherichia coli, Staphylococcus aureus และ Candida albicans การหาปริมาณเชื้อจุลินทรีย์ ในผลิตภัณฑ์ตำรับเสือขาว ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระวิธี DDPH และ ABTS การหาปริมาณรวมฟีนอลลิก การทดสอบความเป็นพิษของสมุนไพรเสือขาว การหาปริมาณสารสำคัญในตำรับเสือขาว และการวิเคราะห์หาโลหะหนักในยาตำรับเสือขาว ส่วนโครงการย่อยที่ 2 ได้ศึกษาผลของสมุนไพรตำรับเสือขาวร่วมกับการฝังเข็มต่อการทำงานของระบบประสาทออโตโนมิกโดยประเมินจากค่าความแปรปรวนอัตราการเต้นของหัวใจ ผลงานวิจัยได้ส่วนสกัดหยาบชั้นเอทิลแอซิเทต เอทานอล และน้ำร้อยละ 0.74-7.79 , 3.70-21.93 และ 5.32-59.94 ตามลำดับ และเมื่อนำส่วนสกัดทดสอบฤทธิ์ต้านจุลินทรีย์พบว่า สารสกัดชั้นเอทิลแอซิเทตมีฤทธิ์ต้านเชื้อ S. aureus แสดงค่า MIC ในช่วง 0.39-12.5 mg/ml โดยสารสกัดกานฉ่าวแสดงฤทธิ์ได้ดีที่สุด มีค่า MIC ที่ ความเข้มข้น 0.39 mg/ml และสารสกัดกานฉ่าวและป๋ายจู๋แสดงฤทธิ์ต้าน C. albicans ที่ค่า MIC เท่ากับ 25 และ 1.56 mg/ml ตามลำดับ สารสกัดชั้นเอทานอลแสดงฤทธิ์ต้าน S. aureus ที่ค่า MIC ในช่วง 0.097-12.5 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร โดยสารสกัดกานฉ่าวแสดงฤทธิ์ได้ดีที่สุดที่ค่า MIC เท่ากับ 0.097 mg/ml ส่วนตำรับเสือขาว ชั้นเอทิลแอซิเทตและเอทานอลแสดงฤทธิ์ต้าน S. aureus ที่ค่า MIC 3.13 mg/ml ฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระ DPPH สารสกัดจากชั้นเอทิลแอซิเทต เอทานอล และน้ำ พบสารสกัดที่แสดงฤทธิ์ต้านอนุมูลอิสระที่ดีที่สุดคือ กานเฉ่า เหลียน เฉียว และจินหยินฮัว มีค่า IC50 เท่ากับ 49.60 + 3.32, 39.39 + 0.94, 33.33 + 2.10 g/ml ตามลำดับ ฤทธิ์ต้าน อนุมูลอิสระวิธี ABTS พบว่าสารสกัดกานเฉ่าจากชั้นเอทิลแอซิเทตและชั้นเอทานอล มีค่าการต้านอนุมูลอิสระดีที่สุด ที่ IC50 เท่ากับ 11.87 + 0.07 และ 30.68 + 4.01 g/ml ตามลำดับ ส่วนชั้นน้ำ พบว่าจินหยินฮัว มีค่าการต้านอนุมูล อิสระที่ดีที่สุด มีค่า IC50 เท่ากับ 35.58 + 0.41 g/ml ส่วนสารสกัดตำรับเสือขาวชั้นเอทานอลแสดงฤทธิ์ดีที่สุด ที่ค่า IC50 เท่ากับ 87.98 + 2.50 g/ml การหาปริมาณรวมสารประกอบฟีนอลลิก พบสารสกัดเหลียนเฉียว ชั้นเอทานอล สาร มีปริมาณมากที่สุดอยู่ที่ 90.51 + 1.59 mg GAE per gram Dry material และพบว่าสารสกัดสมุนไพรเดี่ยวบาง ชนิดชั้นเอทิลแอซิเทตแสดงความเป็นพิษต่อเซลล์ปกติส่วนสารสกัดชั้นเอทานอลและน้ำมีความเป็นพิษน้อยหรือไม่มีพิษสารสกัดทั้งหมดได้นำมาทำเป็นเอกลักษณ์ (fingerprint) ด้วย TLC และหาปริมาณสารสำคัญบางชนิดในสมุนไพร หลักของตำรับเสือขาวพบสาร Astraglaloside II จากสารสกัดหวงฉีที่ชั้นน้ำมากที่สุดร้อยละ 10.95 และสาร 5- Hydroxymethylfurfural จากสารสกัดตั่งเซียม พบในชั้นเอทิลแอซิเทตและเอทานอลใกล้เคียงกันคือ ร้อยละ 1.65 และ 1.58 และผลการตรวจวิเคราะห์หาโลหะหนักในตำรับเสือขาวพบว่าเป็นไปตามเกณฑ์มาตรฐาน แต่พบปริมาณ เชื้อบางชนิดที่ไม่เป็นไปตามเกณฑ์มาตรฐาน จึงนำผลิตภัณฑ์ทั้งหมดเข้ากระบวนการฉายรังสีจนไม่พบเชื้อและเป็นไป ตามมาตรฐาน ผู้ที่ติดเชื้อโควิด–19 ส่งผลทำให้ปอดเสียหายและทำงานได้ไม่เต็มประสิทธิภาพ ตามศาสตร์การแพทย์แผนจีน กล่าวว่าปอดถือเป็นธาตุโลหะที่ทำงานเกี่ยวข้องกับระบบทางเดินหายใจเป็นหลัก ซึ่งเปรียบเหมือนเจ้าแห่งลมปราณ คอยควบคุมการไหลเวียนลมปราณทั่วร่างกาย และจัดการการไหลเวียนของเหลวต่างๆ เช่น น้ำ เลือด และสารอาหาร ส่งไปทั่วร่างกายให้ทำงานสมดุล หรือทำหน้าที่ผลิตและเก็บเกี่ยวพลังงานเลี้ยงร่างกาย เมื่อปอดทำงานไม่สมบูรณ์ จึงส่งผลพลังงานลดลงและภูมิต้านทานร่างกายลดลงด้วย ผลของสมุนไพรตำรับเสือขาวร่วมกับการฝังเข็มต่อการทำงานของระบบประสาทออโตโนมิก พบว่าความดันเลือดขณะหัวใจคลายตัวมีค่าลดลงภายหลังการฝังเข็มเมื่อเทียบกับก่อนฝังเข็ม แต่มีค่าเพิ่มขึ้นในกลุ่มฝังเข็มร่วมกับการได้รับยาตำรับเสือขาว ซึ่งชี้ให้เห็นว่ายาตำรับเสือขาวมีส่วนในการเพิ่มประสิทธิภาพการทำงานของระบบประสาทออโตโนมิก โดยการเพิ่มการทำงานของพาราซิมพาเทติก หรือการเพิ่มการทำงานของหยิน และไม่มีผลต่อสมดุลของระบบประสาทออโตโนมิกและการทำงานของระบบประสาทซิมพาเทติก หรืออาจกล่าวได้ว่ามีส่วนช่วยในการทำงานของปอดได้ดียิ่งขึ้น ซึ่งสอดคล้องกับสรรพคุณที่ได้ระบุไว้ในยาเสือขาว จากผลการทดลองทั้งหมดตำรับเสือขาวมีฤทธิ์ทั้งต้านจุลินทรีย์ ต้านอนุมูลอิสระ และช่วยการทำงานของระบบประสาทให้ดีขึ้น และยังปลอดภัยต่อผู้บริโภค แม้ว่าข้อมูลที่ได้ จะอธิบายเรื่องการสร้างภูมิร่างกายไม่ชัดเจน แต่ข้อมูลเหล่านี้จะนำไปสู่การขอขึ้นทะเบียนตำรับยาแคบซูลเสือขาว หรือป๋ายหู่เซียนตานและการศึกษาวิจัยเพิ่มเติมต่อไป

This research project aims to study biological activities and the amount of chemical constituents of the “ Capsule Sua Khaw or Bai Hu Xian Dan” . To evaluate the immunity boosting effectiveness of Bai Hu Xian Dan that affect consumers. It consists of two subprojects: the study of the biological activity and chemical composition of the Capsule Sua Khaw and effect of Bai-Hu-Xian-Dan combined with acupuncture on heart rate variability in healthy subjects. Sub-project 1, extracted the herbal Sua Khaw, which contained 12 single herbal medicines, and the Sua Khaw formula with three solvents: ethyl acetate, ethanol, and water. The extracts were then tested for their antimicrobial activity against three types of microorganisms: Escherichia coli, Staphylococcus aureus, and Candida albicans. Determination of microorganisms in Sua Khaw formula products, antioxidant activity by DDPH and ABTS method, determination of total phenolic content, toxicity test of Sua Khaw herbs, determination of active ingredients in Sua Khaw formula, and analysis of heavy metals in Sua Khaw formula. The second sub-project studied the effect of the Bai Hu Xian Dan combined with acupuncture on the function of the autonomic nervous system as assessed by the heart rate variability values. The results, obtained the crude extracts of ethyl acetate, ethanol and water at 0.74-7.79, 3.70-21.93 and 5.32-59.94 percent, respectively. When the extracts were tested for antimicrobial activity, it was found that the ethyl acetate extract had antimicrobial activity against S. aureus, showing MIC values in the range of 0.39-12.5 mg/ml, with the GanCao extract showing the best activity, with a MIC value of 0.39 mg/ml. Gan-Cao and Baiju extracts showed activity against C. albicans at MIC values of 25 and 1.56 mg/ml, respectively. The ethanolic extracts showed against S. aureus activity at MIC values in the range of 0.097- 12.5 mg/ml, with the Gan-Cao extract showing the best activity at MIC value of 0.097 mg/ml, while the ethyl acetate and ethanolic extracts of the Sua Khaw formula showed against S. aureus activity at MIC value of 3.13 mg/ml. The antioxidant activity by ABTS method showed that the ethyl acetate and ethanol extracts of Gan-cao had the best antioxidant values at IC50 values of 11.87 + 0.07 and 30.68 + 4.01 g/ml, respectively. For the water extract, it was found that Jin Yin Hua had the best antioxidant value with IC50 values of 35.58 + 0.41 g/ml. The ethanol extract of the Sua Khaw formula extract showed the best activity with IC50 values of 87.98 + 2.50 g/ml. The total phenolic compounds were found to contain the highest amount of Lianqiao extract, ethanolic extract, at 90.51 + 1.59 mg GAE per gram Dry material. It was also found that some single herbal extracts of ethyl acetate, showed toxicity to normal cells, while ethanol and water extracts showed little or no toxicity. All extracts were fingerprinted by TLC and some of the active ingredients in the main herbs of the Sua Khaw formula were quantified. Astraglaloside II from Huang Qi extract was found to be at the highest water extract, at 10.95% and 5-Hydroxymethylfurfural from Tangsium extract was found at the ethyl acetate and ethanol extracts, at approximately 1.65% and 1.58%, respectively. The results of the analysis of heavy metals in the Sua Khaw formula, were found to be in accordance with standard criteria, but the amount of some types of microorganism was found, not to meet the standard criteria. Therefore, all products were irradiated until no germs were found and it met the standard. People who are infected with COVID-19 have their lungs damaged and not functioning at their full potential. According to traditional Chinese medicine, the lungs are considered a metal element that is mainly related to the respiratory system. It is like the Lord of Qi, controlling the flow of Qi throughout the body and managing the flow of fluids such as water, blood and nutrients throughout the body to work in balance or to produce and harvest energy to nourish the body. When the lungs do not work properly, it results in reduced energy and reduced body immunity. The effect of Bai Hu Xian Dan combined with acupuncture on the function of the autonomic nervous system, showed that diastolic blood pressure was decreased after acupuncture compared to before acupuncture, but increased in the group receiving Bai Hu Xian Dan combined with acupuncture. This indicates that the Bai Hu Xian Dan has an effect on enhancing the function of the autonomic nervous system by increasing the parasympathetic function or increasing the function of yin, and does not affect the balance of the autonomic nervous system and the function of the sympathetic nervous system. It can be said that, it helps the lungs work better, which is consistent with the properties stated in Bai Hu Xian Dan medicine. All the experimental results, the Baihu Xian Dan has antimicrobial, antioxidant and helps improve the functioning of the nervous system. It is also safe for consumers. Although the obtained data do not clearly explain the body's immunity, these data will lead to the registration of the “ Capsule Sua Khaw or Baihu Xian Dan medicine” and further research.