การตรวจวิเคราะห์ Vibrio parahaemolyticus (tdh+) จากตัวอย่างกุ้งขาวที่จำหน่าย ในจังหวัดสมุทรปราการโดยใช้เทคนิคดูเพล็กซ์พีซีอาร์

Abstract

งานวิจัยนี้ศึกษาความไวของเทคนิคดูเพล็กซ์พีซีอาร์สำหรับการตรวจสอบ Vibrio parahaemolyticusในกุ้งขาว โดยใช้ยืนเป้าหมายสำหรับตรวจสอบ V. parahaemolyticus คือ t (thermolabile hemolysin gene) และ tdh (thermostable directhemolysin gene) พบว่าความไวของเทคนิคในการตรวจสอบแบคทีเรียโดยตรงจากตัวอย่างกุ้งขาว คือ 10 CFU/g แต่การเพิ่มปริมาณเชื้อก่อนการทำพีซีอาร์ 6 ชั่วโมง จะช่วยเพิ่มประสิทธิภาพของการตรวจสอบได้ดีขึ้น ดังนั้นจึงมีความเหมาะสมในการนำเทคนิคดังกล่าวมาใช้ในการตรวจสอบและเฝ้าระวังแบคทีเรียนี้ในตัวอย่างกุ้งขาว เมื่อนำ เทคนิคดูเพล็กซ์พีซีอาร์มาตรวจสอบการปนเปื้อน V. parahaemolyticus ในกุ้งขาวจำนวนทั้งหมด 60 ตัวอย่าง โดยสุ่มเก็บตัวอย่างจากจังหวัดสมุทรปราการช่วงเดือนสิงหาคม พ.ศ. 2557 ถึงเดือนกันยายน พ.ศ. 2557 พบว่ามีกุ้งขาว จำนวน 42 ตัวอย่าง ที่มีการปนเปื้อน V. parahaemolyticus (t) คิดเป็น 70 เปอร์เซ็นต์ แต่ตรวจไม่พบเชื้อสายพันธุ์ก่อโรค ที่มียีน tah การศึกษานี้แสดงให้เห็นว่าเทคนิคดูเพล็กซ์พีซีอาร์มีประโยชน์ต่อการนำไปใช้เป็นเครื่องมือเพื่อให้ได้มาซึ่งข้อมูล สำหรับนำไปใช้ในการเฝ้าระวังการแพร่ระบาดของเชื้อ และลดปัญหาทางด้านสาธารณสุขที่เกิดจากแบคทีเรียชนิดนี้

The sensitivity of duplex PCR for the detection of Vibrio parahaemolyticus in whiteleg shrimp was pursued. Duplex reaction was carried out using two sets of primers targeting genes encoded thermolabile hemolysin (tl) and thermostable direct hemolysin (tdh). The sensitivity of direct detection of bacteria in spiked samples of whiteleg shrimp was shown as 10³ CFU/g. The detection efficiency was improved by the addition of 6 hour enrichment step prior to duplex PCR. A total of 60 samples of whiteleg shrimp were randomly collected from Samutprakarn during August to September 2014. Total V. parahaemolyticus was detected in 42 samples (70%) using duplex PCR but virulent-associated tdh gene of V. parahaemolyticus was not found. The duplex PCR is a promising technique for detection and monitoring both target organisms which could lead to the management of proper sanitation and decrease public health hazard.