วิธีเตรียมน้ำยา Tissue Thromboplastin จากสมองกระต่าย สำหรับการทดสอบ

Abstract

Prothrombin Time (PT) เป็นการทดสอบที่ใช้ในการตรวจสอบการทำงานของปัจจัยการแข็งตัวของเลือดใน extrinsic pathway การทดสอบ prothrombin time นั้น น้ำยาที่ใช้ในการทดสอบคือน้ำยา tissue thromboplastin ซึ่งเตรียมได้จากสมองคนและสัตว์ต่างๆ เช่น กระต่าย แต่เนื่องจากน้ำยา tissue thromboplastin มีราคาสูง ดังนั้น ผู้วิจัยจึงได้ทำการสกัดน้ำยา tissue thromboplastin จากสมองกระต่าย โดยใช้วิธี acetone extract และ normal saline extract โดยนำสารที่สกัดได้นี้มาทดสอบหาค่า PT โดยการศึกษา Within run precision และ Between run precision ของน้ำยาที่เตรียมโดยวิธี acetone extract มีค่าสัมประสิทธิ์ความแปรปรวน (%CV) เท่ากับ 2.59% และ 8.75% ตามลำดับ และการศึกษา Within run precision และ Between run precision ของน้ำยาที่เตรียมโดยวิธี normal saline extract ค่าสัมประสิทธิ์ความแปรปรวน (%CV) เท่ากับ 2.88% และ 12.63% ตามลำดับ ซึ่งค่าที่ได้ดังกล่าวอยู่ในช่วงที่ยอมรับได้ตามมาตรฐานของ National (UK) Reference Laboratory for Anticoagulant Reagent and Control เมื่อศึกษาเปรียบเทียบน้ำยาที่เตรียมได้กับน้ำยาที่ซื้อจากต่างประเทศ (thromboplastin IS) พบว่ามีค่าสหสัมพันธ์ ( r ) ของน้ำยาที่เตรียมโดยวิธี acetone extract และ normal saline extract เปรียบเทียบกับน้ำยาที่ซื้อจากต่างประเทศเท่ากับ 0.97 และ 0.98 ตามลำดับ จากการศึกษาความคงตัวของน้ำยาที่เตรียมได้ พบว่า เมื่อเก็บ 4 °ซ น้ำยาที่เตรียมโดยวิธี acetone extract มีความคงตัวอยู่ได้ภายใน 2 วัน ส่วนน้ำยาที่เตรียมโดยวิธี normal saline extract มีความคงตัวอยู่ได้ภายใน 5 วัน (p<0.05) การเก็บที่ 0 °ซ. และ -20 °ซ น้ำยาที่เตรียมทั้งสองวิธีมีความคงตัวอยู่ได้ไม่ต่ำกว่าสองเดือน (p<0.05)

Prothrombin Time (PT), a test used to detect the function oof coagulation factors in extrinsic pathway, utilize tissue thromboplastin reagent preprepared from brain and other soft tissues of human and other animals for the assay. Rabbit brain is alternatively used to prepare the reagent. Preparation of tissue thromboplastin reagent from rabbit brain using acetone and normal saline extraction is studied. The reproducibility study of PT assays using acetone extract and normal saline extract thromboplastin reagent shows the coefficient of variations (%CV) of within-run and between-run precisions of 2.59%, 8.75%, 2.58% and 12.63% respectively. The relation coefficients ( r ) of acetone and normal saline extract thromboplastin reagents with Thromboplastin IS (Date (SUA) are 0.97, 0.98 respectively. Comparison of acetone and saline extract thromboplastin reagents VS. Thromboplastin IS shows the relation coefficients ( r ) of 0.97 and 0.98, respectively. At 4 ° C, the stability of acetone extract thromboplastin reagent can be stored for 2 days. While normal saline extract thromboplastin reagent can be stored for 5 days. (p<0.05). At 0 ° C and -20° C, both reagents can be stored up to 2 months (p<0.05).