การเตรียมตัวอย่างจีโนมิกดีเอ็นเอจากเลือดรวมด้วยวิธีใหม่

Abstract

การเตรียมตัวอย่างจีโนมิกดีเอ็นเอจากเลือดรวม เป็นขั้นตอนที่สำคัญขั้นตอนแรกของการตรวจวิเคราะห์ดีเอ็นเอทางห้องปฏิบัติการ เช่น การตรวจวิเคราะห์หาความผิดปกติของยีนธาลัสซีเมีย หรือการตรวจหาความผิดปกติของโรคฮีโมฟีเลีย การเตรียมตัวอย่างจีโนมิกดีเอ็นเอให้ได้ในปริมาณมาก และรวดเร็วนั้น เป็นแนวทางหนึ่งที่สามารถให้การวินิจฉัยความผิดปกติของโรคต่างๆ ดังกล่าวได้รวดเร็วขึ้น นอกจากนี้ยังช่วยให้แพทย์ที่ทำการตรวจให้คำแนะนำการป้องกันโรคได้อย่างถูกต้องและรวดเร็ว ดังนั้นรายงานนี้จึงได้พัฒนาวิธีการเตรียมตัวอย่างจีโนมิกดีเอ็นเอโดยวิธี salting-out ใหม่ที่ง่าย ไม่มีการใช้ 3% dextran in normal saline เพื่อตกตะกอนเม็ดเลือดแดงและ pronase เพื่อย่อย nuclease ซึ่งได้จีโนมิกดีเอ็นเอในปริมาณเพียงพอ และตัวอย่างจีโนมิกดีเอ็นเอที่ได้มีความบริสุทธิ์ เมื่อเทียบกับวิธี salting-out เดิม ได้นำดีเอ็นเอที่เตรียมได้ ไปหาปริมาณและคุณภาพโดยการนำไปวัดด้วย spectrophotometer ที่ O.D. 260 และ 280 นาโนเมตร พบว่าปริมาณและคุณภาพของดีเอ็นเอที่เตรียมได้ไม่แตกต่างกันมาก จากนั้นได้นำไป run agarose gel electrophoresis และตรวจสอบความบริสุทธิ์โดยการนำไปทำพีซีอาร์ ซึ่งผลที่ได้เมื่อเทียบกับวิธีเดิมแล้วให้ผลที่ไม่แตกต่างกับวิธี salting-out เดิม นอกจากจะเสียค่าใช้จ่ายน้อยแล้ว ยังใช้เวลาในการเตรียมไม่นาน สามารถนำไปใช้ในห้องปฏิบัติการที่มีการตรวจวิเคราะห์หาความผิดปกติของโรคที่เกี่ยวข้องทางพันธุกรรมอย่างได้ผลต่อไป

Preparation of genomic DNA from whole blood is an important process for analysis of inherited disorders such as thalassemia or hemophilia. The rapid preparation process with large amount of genomic DNA will lead to rapid diagnosis of diseases and monitoring of patients. In this study, the new genomic DNA preparation method was developed for the detection of the thalassemic genes and other inherited disorders. The new genomic DNA preparation method did not use 3% dextran in normal saline to precipitate red blood cell and pronase to remove nuclease. Analyse of quantity and quality of genomic DNA from the new developed salting-out method was compared with genomic DNA from the original salting-out method by spectrophotometer method at O.D. 260 and 260 nm. Demonstrated that no significant difference in two tests. Purify of genome DNA of the new developed salting-out method was compared with genomic DNA of the original salting-out method using the agarose gel electrophoresis and the polymerase chain reaction indicated that no significant difference in two tests. The new developed salting-out method provided high quantity and pure genomic DNA with low tests. The new developed salting-out method provided high quantity and pure genomic DNA with low cost and less time consuming which is an appropriate method for the detection of inherited disorders.